Wild Taq DNK polimeraza
Taq DNK polimeraza je termostabilna DNK polimeraza iz Thermus aquaticus YT-1, koja posjeduje aktivnost 5′→3′ polimeraze i aktivnost endonukleaze 5´ režnja.
Komponente
| Komponenta | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq bafer | 2×1 mL | 2×10 mL | 2×50 mL | 5×200 mL |
| Taq DNK polimeraza (5 U/μL) | 0,1 mL | 1 mL | 5 mL | 5×10 mL |
Stanje skladištenja
Transportovati na temperaturi od 0°C i čuvati na -25°C~-15°C.
Definicija jedinice
Jedna jedinica je definirana kao količina enzima koja inkorporira 15 nmol dNTP u materijal nerastvorljiv u kiselini za 30 minuta na 75°C.
Kontrola kvaliteta
1.Test čistoće proteina (SDS-PAGE):Čistoća Taq DNK polimeraze bila je ≥95% određena SDS-PAGE analizom.
2.Endonuclease Activity:Najmanje 5 U Taq DNK polimeraze sa 1 μg λDNA tokom 16 sati na 37 ℃ ne rezultira degradacijom kao što je utvrđeno.
3.Exonuclease Activity:Najmanje 5 U Taq DNK polimeraze sa 1 μg λ -Hind Ⅲ digestira DNK tokom 16 sati na 37 ℃ ne rezultira degradacijom koja se može detektovati kako je utvrđeno.
4.Nickase Activity:Najmanje 5 U Taq DNK polimeraze sa 1 μg pBR322 DNK tokom 16 sati na 37°C ne rezultira degradacijom kao što je utvrđeno.
5.Aktivnost RNase:Najmanje 5 U Taq DNK polimeraze sa 1,6 μg MS2 RNK tokom 16 sati na 37°C ne rezultira degradacijom kao što je utvrđeno.
6.E. coliDNK:5 U Taq DNK polimeraze je testirano na prisustvo genomske DNK E. coli pomoću TaqMan qPCR sa prajmerima specifičnim za lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminacija genomske DNK E. coli je ≤1 kopija.
7.PCR amplifikacija (5,0 kb Lambda DNK)- Reakcija od 50 µL koja sadrži 5 ng Lambda DNK sa 5 jedinica Taq DNK polimeraze za 25 ciklusa PCR amplifikacije rezultira očekivanim proizvodom od 5,0 kb.
Reaction Setup
| Komponente | Volume |
| Predložak DNKa | opciono |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP miks (10mM svaki) | 1 μL |
| 10×Taq pufer | 5 μL |
| Taq DNK polimerazab | 0,25 μL |
| Voda bez nukleaza | Do 50 μL |
napomene:
1) Optimalna koncentracija reakcije različitih šablona je različita.Sledeća tabela prikazuje preporučenu upotrebu šablona za reakcijski sistem od 50 µL.
| DNK | Iznos |
| Genomski | 1 ng-1 μg |
| Plazmid ili virus | 1 pg-1 ng |
2) Optimalna koncentracija Taq DNK polimeraze može se kretati od 0,25 µL~1 µL u specijalizovanim aplikacijama.
ReakcijaProgram
| Korak | Temperatura(°C) | Vrijeme | Ciklusi |
| Početna denaturacijaa | 95 ℃ | 5mins | - |
| Denaturacija | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 ciklusa |
| Žarenjeb | 60 ℃ | 15 s | |
| Produžetak | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Final Extension | 72 ℃ | 5mins | - |
napomene:
1) Početno stanje denaturacije je pogodno za većinu reakcija amplifikacije i može se modificirati prema složenosti strukture šablona.Ako je struktura šablona složena, vrijeme preddenaturacije se može produžiti na 5 – 10 minuta kako bi se poboljšao početni učinak denaturacije.
2) Temperaturu žarenja treba podesiti prema Tm vrijednosti prajmera, koja je općenito postavljena na 3~5 ℃ niže od vrijednosti Tm prajmera;Za složene šablone, potrebno je podesiti temperaturu žarenja i produžiti vrijeme produžetka kako bi se postiglo efikasno pojačanje.
