Reagens za otpuštanje uzorka
Reagens za otpuštanje uzorka je za molekularne POCT dijagnostičke scenarije.Za dva sistema direktne amplifikacije LAMP i direktne amplifikacije PCR nema potrebe za ekstrakcijom nukleinske kiseline.Sirovi lizat uzorka može se direktno pojačati, ciljni gen se može precizno otkriti, vrijeme detekcije uzorka može se dodatno skratiti, što savršeno odgovara zahtjevima primjene molekularnog POCT-a.Pogodan je za briseve nosa, grla i druge vrste uzoraka.Obrađeni uzorci mogu se direktno koristiti za kvantitativnu PCR ili LAMP detekciju fluorescencije u realnom vremenu, a isti rezultati kao i konvencionalnim metodama ekstrakcije mogu se postići bez komplikovanih operacija ekstrakcije nukleinske kiseline.
Uslovi skladištenja
Transportovati i čuvati na sobnoj temperaturi.
Kontrola kvaliteta
Funkcionalna detekcija – kvantitativni qPCR: sistem reagensa za oslobađanje uzorka od 800 μl je pojačan
sa 1000 kopija novog pseudovirusa, jednim uzorkom nazalnog brisa, rezultirajući sličnim krivuljama amplifikacije iΔCt vrijednosti unutar ± 0,5 Ct.
Experimental Procedures
1. Uzmite 800 μl reagensa za oslobađanje uzorka i rasporedite otopinu za lizu u epruvetu za uzorkovanje od 1,5 mL
2. Uzmite bris nosa ili bris grla uz bris; Procedura uzimanja uzorka nosnog brisa: uzmite sterilni bris i stavite ga u nozdrve, polako napredujte do oko 1,5 cm dubine, lagano rotirajte 4 puta uz nosnu sluznicu duže od 15 sekundi , zatim ponovite istu operaciju na drugoj nosnoj šupljini sa istim tamponom. Postupak uzimanja uzorka brisa grla: uzmite sterilni bris i nežno, brzo obrišite faringealne krajnike i zadnji zid ždrela 3 puta.
3.Stavite bris odmah u epruvetu za uzorkovanje.Glavu štapića treba rotirati i miješati u otopini za skladištenje najmanje 30 sekundi kako bi se osiguralo da je uzorak potpuno eluiran u epruveti za uzorkovanje.
4. Inkubacija na sobnoj temperaturi (20~25℃) u trajanju od 1 min, priprema pufera za lizu je završena.
5. Oba sistema RT-PCR i RT-LAMP od 25 μl bili su kompatibilni sa dodatkom šablona od 10 μl za eksperimente detekcije.
Bilješke
1. Minimalna količina direktnog lizata uzorka koja odgovara jednom brisu može se podesiti na 400 μl, što se može podesiti prema potrebama testiranja.
2. Nakon što je uzorak obrađen reagensom za oslobađanje uzorka, preporučuje se da se sljedeća faza testiranja provede što je prije moguće, a interval čekanja je poželjno kraći od 1 sata.
3. pH lizata uzorka je kisela, a sistem za detekciju treba da ima određeni pufer.Pogodan je za većinu detekcije PCR, RT-PCR i LAMP fluorescencije sa pH puferom, ali nije pogodan za LAMP kolorimetrijsku detekciju bez pufera.
