Rnase A
Ribonukleaza A (RNaseA) je jednolančani polipeptid koji sadrži 4 disulfidne veze molekulske težine od oko 13,7 kDa.RNKaza A je endoribonukleaza koja specifično razgrađuje jednolančanu RNK na C i U ostacima.Konkretno, cijepanje prepoznaje fosfodiestarsku vezu formiranu od 5′-riboze nukleotida i fosfatne grupe na 3′-ribozi susjednog pirimidinskog nukleotida, tako da 2,3′-ciklički fosfati odgovaraju hidrofosfatima 3 ′nukleozidni fosfati (npr. pG-pG-pC-pA-pG se cijepa od strane RNase A za stvaranje pG-pG-pCp i A-PG).RNaza A je najaktivnija u cijepanju jednolančane RNK.Preporučena radna koncentracija je 1-100μG/mL, kompatibilna sa različitim reakcionim sistemima.Niska koncentracija soli (0-100 mM NaCl) može se koristiti za rezanje jednolančane RNK, dvolančane RNK i RNK lanaca formiranih RNA-DNK hibridizacijom.Međutim, pri visokoj koncentraciji soli (≥0,3 M), RNaza A samo specifično cijepa jednolančanu RNK.
RNaza A se najčešće koristi za uklanjanje RNK tokom pripreme plazmidne DNK ili genomske DNK. Bez obzira da li je DNaza aktivna tokom procesa pripreme, može lako uticati na reakciju.Tradicionalna metoda ključanja u vodenom kupatilu može se koristiti za inaktivaciju aktivnosti DNaze.Ovaj proizvod ne sadrži DNazu i proteazu i ne zahtijeva toplinsku obradu prije upotrebe.Osim toga, ovaj proizvod se također može koristiti u eksperimentima molekularne biologije kao što su analiza zaštite RNaze i analiza RNA sekvence.
Uslovi skladištenja
Proizvod se može čuvati na -25～-15℃, važi 2 godine.
Instrukcije
Ovo je jedna od uobičajenih metoda za pripremu otopine za pohranu RNase A.Takođe se može pripremiti od stranedruge metode prema tradicionalnim metodama iz laboratorijske ili referentne literature (nprdirektno otapanje u 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 ili Tris-NaCl otopini)
1. Koristite 10 mM natrijum acetata (pH 5,2) da pripremite 10 mg/mL rastvora za skladištenje RNaze A
2. Zagrijavanje na 100 ℃ 15 min
3. Ohladite na sobnu temperaturu, dodajte 1/10 zapremine 1 M Tris-HCl (pH 7,4), podesite pH na 7,4 (zana primjer, dodajte 500 ml 10g/ml otopine za pohranu RNase 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Podupakovano na -20℃ za zamrznuto skladištenje, koje može biti stabilno do 2 godine.
[Napomene]: Prilikom ključanja rastvora RNazeA u neutralnim uslovima, formiraće se precipitacija RNaze;Kuhajte ga na nižem pH, a ako ima taloga, može se uočiti, što može biti uzrokovano prisustvom proteinskih nečistoća.Ako se nakon ključanja nađe sediment, nečistoće se mogu ukloniti centrifugiranjem velikom brzinom (13000 rpm), a zatim podpakirati za skladištenje u zamrzavanju.
Informacije o proizvodu
| Sinonimi | ribonukleaza I;Ribonukleaza pankreasa;ribonukleaza 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolaza;Rnaza A;Endoribonulceaza I |
| CAS br. | 9001-99-4 |
| Izgled | Bijeli liofilizirani prah |
| Molekularna težina | ~ 13,7 kDa (sekvenca aminokiselina) |
| Ph vrijednost | 7.6 (raspon aktivnosti 6-10) |
| Odgovarajuća temperatura | 60℃ (opseg aktivnosti 15-70℃) |
| Agent za aktiviranje | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Rnase Inhibitor |
| Metoda inaktivacije | Ne može se inaktivirati zagrijavanjem, preporučuje se korištenje centrifugalne kolone |
| Porijeklo | Bovine |
| Rastvorljivost | Rastvorljiv u vodi (10mg/ml) |
| Gubitak na suvom | ≤5,0% |
| Aktivnost enzima | ≥60 Kunitz jedinica/mg |
| Izoelektrična tačka | 9.6 |
Bilješke
Radi vaše sigurnosti i zdravlja, nosite laboratorijske mantile i jednokratne rukavice za rad.
