Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kataloški broj: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) je multipleksni kvantitativni PCR komplet baziran na RNK kao šablonu.U procesu eksperimenta obavljena je reverzna transkripcija i kvantitativni PCR u istoj epruveti, što je pojednostavilo rad eksperimenta i smanjio rizik od kontaminacije.U ovom kompletu, prvi lanac cDNK je efikasno sintetizovan reverznom transkriptazom otpornom na toplotu i kvantitativno pojačan HotStart Tag DNK polimerazom.Komplet uglavnom sadrži optimizirani MP pufer, mješavinu enzima, itd. Puferska otopina već sadrži Mg2+i dNTP.Pored toga, dodaju se faktori koji mogu efikasno inhibirati nespecifičnu PCR amplifikaciju i poboljšati efikasnost amplifikacije višestrukih qPCR reakcija, što može osigurati efikasnost amplifikacije i provesti do višestruke reakcije amplifikacije.Sistem dUTP/UDG je dodat kako bi se efikasno spriječio rizik od kontaminacije aerosolom.
Komponente
1. Buffer
2. Enzimska mješavina
Specifikacija
| Hot Start | Ugrađeni vrući start |
| Metoda detekcije | Detekcija prajmera i sonde |
| PCR metoda | RT-qPCR u jednom koraku |
| Polimeraza | Taq DNK polimeraza |
| Vrsta uzorka | DNK |
Uslovi skladištenja
Proizvod se isporučuje sa suvim ledom i može se čuvati na -25~-15℃ 1 godinu.Treba izbjegavati čestezamrzavanje-odmrzavanje.Preporučuje se čuvanje odvojeno.
Instrukcije
1.Reakcija Sistem
| Komponente | Zapremina (μL) | Konačna koncentracija |
| 2 × MP bafer | 12.5 | 1× |
| Enzimska mješavina | 1 | - |
| Mješavina prajmera/sonde (2,5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Template RNA | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | do 25 | - |
napomene:
Obavezno dobro promiješajte prije upotrebe, izbjegavajte prekomjerne mjehuriće uzrokovane snažnim vibracijama.
a.Koncentracija prajmera: Primer mešavina uključujući multipleks prajmer, u zavisnosti od situacije optimalna koncentracija prajmera može između 0.l i 1.0μM.
b.Koncentracija sonde: Mješavina sonde uključujući fluorescentnu razliku u označavanju multipleksne sonde, ovisno o situaciji, optimalna koncentracija sonde može biti između 0,05 i 0,5 μM.
c.Razrjeđivanje šablona: qPCR je vrlo osjetljiv i preporučuje se razrjeđivanje šablona.Kontrolna vrijednost Ct je prikladna između 20 i 35.
d.Priprema sistema: Molimo pripremite u ultra čistom radnom stolu, pipetoru i reakcijskoj epruveti bez ostatka nukleaze;preporučuje se upotreba glave pištolja sa filterskim elementom.Izbjegavajte unakrsnu kontaminaciju i kontaminaciju aerosolom.
2. Optimizirani biciklizamProtokol
| Ciklus korak | Temp. | Vrijeme | Ciklusi |
| Reverzna transkripcija | 50℃a | 20mins | 1 |
| Inicijalna denaturacija | 95℃ | 5mins | 1 |
| Reakcija amplifikacije | 95℃ | 15sec |
40-45 |
| 60℃ b | 30sec c |
napomene:
a.Reverzna transkripcija: Temperatura može izabrati 42°C ili 50°C.
b.Reakcija amplifikacije: Temperatura se podešava prema Tm vrijednosti dizajniranih prajmera.
c.Akvizicija fluorescentnog signala: Podesite eksperimentalni postupak u skladu sa zahtjevima priručnika za instrument.
Bilješke
Nosite potrebnu osobnu zaštitnu opremu, kao što su laboratorijski mantil i rukavice, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost.
