Multiplex qPCR Probe Premix
Kataloški broj: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (bazirano na boji) je prethodno rješenje za 2 × kvantitativnu PCR amplifikaciju u realnom vremenu koju karakterizira visoka osjetljivost i specifičnost, koja je plave boje i ima efekat dodavanja uzorka.Ovaj proizvod je 2× Mix prethodno pomiješan reagens koji omogućava do četiri fluorescentne kvantitativne PCR reakcije u jednoj reakcionoj jažici.Ovaj proizvod sadrži genetski modificiranu metodu antitijela za hot-start Taq enzim, značajno poboljšavajući osjetljivost i specifičnost amplifikacije.U isto vrijeme, ovaj proizvod je duboko optimizirao pufer za više reakcija, koji može poboljšati efikasnost amplifikacije reakcije i promovirati učinkovito pojačanje šablona niske koncentracije.Ovaj proizvod se može koristiti za genotipizaciju i multipleks kvantitativnu analizu.
Specifikacija
| Hot Start | Ugrađeni vrući start |
| Metoda detekcije | Detekcija prajmera i sonde |
| PCR metoda | qPCR |
| Polimeraza | Taq DNK polimeraza |
| Vrsta uzorka | DNK |
Uslovi skladištenja
Proizvod se isporučuje sa suvim ledom i može se čuvati na -25~-15℃ 2 godine.
Instrukcije
1. ReakcijaSistem
| Komponente | Zapremina (μL) | Konačna koncentracija |
| 2× TaqMan multipleks qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Mješavina prajmera (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Mješavina sonde (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox referentna boja | 0.5 | 1× |
| Predložak DNK/cDNK | 1-10 | - |
| ddH2O | do 25 | - |
napomene:Temeljito promiješajte prije upotrebe kako biste izbjegli prekomjerne mjehuriće od snažnog mućkanja.
a.Koncentracija prajmera: Primer Mix sadrži više parova prajmera, obično svaki prajmer u konačnoj koncentraciji od 0,2 μmol/L i može se podesiti između 0,1 i 0,5 μmol/L prema potrebi.
b.Koncentracija sonde: Probe Mix sadrži više sondi sa različitim fluorescentnim signalima, a koncentracija svake sonde može se podesiti između 50 i 250 nmol/L prema specifičnoj situaciji.
1.Rox dye reference: Koristi se na instrumentima za pojačavanje PCR u realnom vremenu kao što je Applied Biosystems za ispravljanje greške fluorescentnog signala generiranog između bunara;ovaj proizvod ne sadrži referencu Rox boje.Cas#10200 se preporučuje ako je potrebno.
2.Razblaživanje šablona: qPCR je veoma osetljiv i preporučuje se da se šablon razblaži za upotrebu.Ako je šablon temeljni rastvor cDNK, zapremina šablona ne bi trebalo da prelazi 1/10 ukupne zapremine.
3.Reakcioni sistem: preporučuje se 25 μL, 30 μL ili 50 μL kako bi se osigurala efikasnost i ponovljivost amplifikacije ciljnog gena.
4.Priprema sistema: Molimo pripremite se u super čistoj klupi i koristite vrhove i reakcijske epruvete bez ostataka nukleaze;preporučljivo je koristiti vrhove sa filter patronama.Izbjegavajte unakrsnu kontaminaciju i kontaminaciju aerosolom.
2.Reakcioni program
| Korak ciklusa | Temp. | Vrijeme | Ciklusi |
| Inicijalna denaturacija | 95 ℃ | 5mins | 1 |
| Denaturacija | 95 ℃ | 15sec | 45 |
| Žarenje/produženje | 60 ℃ | 30sec |
napomene:
1.Žarenje/produženje: Temperatura i vrijeme se mogu na odgovarajući način podesiti prema projektovanoj vrijednosti prajmera Tm.
2.Akvizicija fluorescentnog signala: Vrijeme akvizicije fluorescentnog signala potrebno za različite instrumente za qPCR detekciju je različito, molimo podesite prema minimalnom vremenskom ograničenju.Vrijeme nekoliko uobičajenih instrumenata je postavljeno na sljedeći način:
20 sekundi: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek: Applied Biosystems 7300
32 sek: Applied Biosystems 7500
Bilješke
Nosite neophodnu osobnu zaštitnu opremu, kao što je laboratorijski mantil i rukavice, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost!
