2×HiF Taq plus Master Mix
Kataloški broj: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (sa bojom) je 2×premiješano rješenje spremno za upotrebu koje sadrži Plus HIF DNK polimerazu, dNTPs i optimizirani pufer.Dva monoklonska antitela na sobnoj temperaturi koja inhibiraju aktivnost polimeraze i aktivnost 3′→5′eksonukleaze dodaju se glavnoj mešavini za lak i visoko specifičan Hot Start PCR.Faktor ekstenzije se dodaje glavnoj mješavini kako bi se enzimu dao kapacitet amplifikacije dugog fragmenta, dužina amplifikacije može biti do 13 kb, enzim ima aktivnost 5′→3′ DNK polimeraze i 3′→5′ aktivnost egzonukleaze, njegova vjernost je 83 puta veća od Taq DNK polimeraze, što je 9 puta više od obične DNK polimeraze.Pogodan je za pojačavanje složenih šablona, proizvod za pojačavanje je tupi kraj.
2×HIF Taq plus Master Mix (sa bojom) ima prednosti brzog i jednostavnog, visoke osjetljivosti, jake specifičnosti, dobre stabilnosti, itd., reakcionom sistemu treba samo dodati prajmere i šablone, a može se pojačati pomoću dva- protokol koraka, pojednostavljujući eksperimentalne korake i uštedu vremena.Ovaj proizvod sadrži indikatorske boje za elektroforezu, a PCR proizvodi se mogu koristiti direktno za elektroforezu.Osim toga, proizvod sadrži i specifično zaštitno sredstvo, tako da glavna mješavina može održati stabilnu aktivnost nakon ponovnog zamrzavanja-odmrzavanja.
Uslovi skladištenja
Proizvode treba čuvati na -25~-15℃ 1 godinu.
Specifikacije
Specifikacija proizvoda | Master Mix |
Koncentracija | 2× |
Hot Start | Ugrađeni Hot Start |
Overhang | Blunt |
Brzina reakcije | Rapid |
Veličina (konačni proizvod) | Do 13 kb |
Uslovi za prevoz | Suhi led |
Vrsta proizvoda | PCR premiksi visoke vjernosti |
Instrukcije
1.PCR reakcijski sistem
Komponente | Zapremina (μL) |
DNK šablon | Pogodno |
Prednji prajmer (10 μmol/L) | 2.5 |
Reverse Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
ddH2O | do 50 |
2.Preporučena upotreba različitih šablona
Vrsta šablona | Pojačajte fragmente od 1 kb do 10 kb |
Genomska DNK | 50ng-200ng |
Plazmid ili virusna DNK | 10pg-20ng |
cDNK | 1-2,5 µL (ne prelazi 10% konačnog volumena PCR reakcije) |
3.Amplification Protocol
1) Protokol u dva koraka (šablon složenosti)
Korak ciklusa | Temp. | Vrijeme | Ciklusi |
Početna denaturacija | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturacija | 98℃ | 10sec | 30-35 |
Produžetak | 68℃ | 30 sek/kb | |
Završno produženje | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Protokol u tri koraka (običan protokol)
Korak ciklusa | Temp. | Vrijeme | Ciklusi |
Početna denaturacija | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturacija | 98℃ | 10sec | 30-35 |
Žarenje | 60℃ | 20 sek | |
Produžetak | 72℃ | 30 sek/kb | |
Završno produženje | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Protokol gradijenta žarenja (predložak složenosti)
Korak ciklusa | Temperatura | Vrijeme | Ciklusi |
Početna denaturacija | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturacija | 98℃ | 10 sek | 15 (1℃ smanjenje po ciklusu) |
Gradijentno žarenje | 70-55℃ | 20 sek | |
Produžetak | 72℃ | 30 sek/kb | |
Denaturacija | 98℃ | 10 sek |
20 |
Žarenje | 55℃ | 20 sek | |
Produžetak | 72℃ | 30 sek/kb | |
Završno produženje | 72℃ | 5 min | 1 |
Karakteristike pod različitim protokolom pojačanja
Protocol | Two-Step | Tri koraka | Gradijentno žarenje |
Spec. | brzo | srednje | sporo |
Specifičnost | visoko | srednje | visoko |
PCR prinos | srednje | visoko | srednje |
Stopa detekcije | visoko | srednje | visoko |
Bilješke
Nosite neophodnu osobnu zaštitnu opremu, kao što je laboratorijski mantil i rukavice, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost!