UDG/UNG enzimi
UDG (uracil DNK glikozilaza) može katalizirati hidrolizu N-glikozidne veze između uracil baze i šećerno-fosfatne kičme u ssDNA i dsDNK.Lako može kontrolisati aerosolno zagađenje i pogodan je za uobičajene sisteme molekularne biologije kao što su PCR, qPCR, RT-qPCR i LAMP.
Specifikacije
| Expression Host | Rekombinantna E. coli sa genom uracil DNA glikozilaze |
| Molekularna težina | 24. 8kDa |
| Čistoća | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Inaktivacija toplote | 95℃, 5~10 min |
| Definicija jedinice | Jedna jedinica (U) je definirana kao količina enzima koja je potrebna da katalizira hidrolizu dsDNK koja sadrži l μg dU u 30 minuta na 25 ℃. |
Skladištenje
Proizvod treba čuvati na -25℃~-15°C dve godine.
Instrukcije
1.Priprema PCR reakcione smeše prema sledećem sistemu
| Komponente | Zapremina (μL) | Konačna koncentracija |
| 10×PCR pufer (Mg²+plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10 mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Leach |
| Predložak DNK | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNK polimeraza (5 U/μL) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Uracil DNK glikozilaza (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Do 50 | - |
Bilješka: Prema eksperimentalnim zahtjevima, konačna koncentracija dUTP se može podesiti između 0,2-0,6 mmol/L, a 0,2 mmol/L dTTP se može dodati selektivno.
2.Postupak amplifikacije
| Korak ciklusa | Temperatura | Vrijeme | Ciklusi |
| degradacija šablona koji sadrži dU | 25℃ | 10mins | 1 |
| UDG aktivacija, početna denaturacija šablona | 95℃ | 5~10 min | 1 |
| Denaturacija | 95℃ | 10 sek |
30-35 |
| Žarenje | 60℃ | 20 sek | |
| Produžetak | 72℃ | 30sec/kb | |
| Završno produženje | 72℃ | 5 min | 1 |
Bilješka: Vrijeme reakcije na 25°C može se podesiti unutar 5-10 minuta prema eksperimentalnim zahtjevima.
Bilješke
1.UDG je aktivan u većini pufera za PCR reakciju.
2.Enzime treba čuvati u kutiji za led ili u ledenoj kupki kada se koriste, a odmah nakon upotrebe treba ih čuvati na -20°C.
3.Nosite neophodnu osobnu zaštitnu opremu, kao što je laboratorijski mantil i rukavice, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost!
