Inhibitor Rnaze (bez glicerola)
Inhibitor mišje RNase je rekombinantni inhibitor mišje RNAze eksprimiran i pročišćen iz E.coli.Veže se za RNKazu A, B ili C u omjeru 1:1 putem nekovalentnog vezivanja, čime inhibira aktivnost tri enzima i štiti RNK od degradacije.Međutim, nije efikasan protiv RNaze 1, RNaze T1, S1 nukleaze, RNaze H ili RNaze iz Aspergillusa.Inhibitor mišje RNase testiran je pomoću RT-PCR, RT-qPCR i IVT mRNA, i bio je kompatibilan sa različitim komercijalnim reverznim transkriptazama, DNK polimerazama i RNA polimerazama.
U poređenju sa inhibitorima humane RNKaze, mišji inhibitor RNKaze ne sadrži dva cisteina koji su visoko osjetljivi na oksidaciju koja uzrokuje inaktivaciju inhibitora.To ga čini stabilnim pri niskim koncentracijama DTT (manje od 1 mM).Ova karakteristika ga čini pogodnim za upotrebu u reakcijama gdje su visoke koncentracije DTT štetne za reakciju (npr. RT-PCR u realnom vremenu).
Aprimjena
Ovaj proizvod se može široko koristiti u bilo kojem eksperimentu gdje je interferencija RNase moguća kako bi se izbjegla degradacija RNK, kao što su:
1. Sinteza cDNK prvog lanca, RT-PCR, RT-qPCR, itd.;
2.Zaštititi RNK od degradacije u in-vitro transkripciji/translaciji (npr. virusna replikacija in vitro);
3. Inhibicija aktivnosti RNKaze tokom izolacije i prečišćavanja RNK.
Uslovi skladištenja
Čuvati na -25～-15℃;
Ciklusi zamrzavanja-odmrzavanja ≤ 5 puta;
Vrijedi 1 godinu.
Definicija jedinice
Jedna jedinica je definisana kao količina inhibitora RNaze koja je potrebna da inhibira aktivnost 5 ng RNaze A za 50%.
Molekularna težina
Inhibitor RNaze (bez glicerola) je protein od 50 kDa.
Kontrola kvaliteta
Egzonukleaza Aktivnost:
Inkubacija 40 U enzima sa 1 μg λ-Hind III digestije DNK tokom 16 sati na 37°C nije rezultirala degradacijom DNK koja se nije mogla detektovati kao što je utvrđeno gel elektroforezom.
Aktivnost endonukleaze:
Inkubacija 40 U enzima sa 1 μg λ DNK tokom 16 sati na 37°C nije rezultirala degradacijom DNK koja se nije mogla detektovati kao što je utvrđeno gel elektroforezom.
Nicking Aktivnost:
Inkubacija 40 U enzima sa 1 μg pBR322 tokom 16 sati na 37℃ nije rezultirala degradacijom DNK koja se nije mogla detektovati kao što je utvrđeno gel elektroforezom.
RNase Aktivnost:
Inkubacija 40 U enzima sa 1,6 μg MS2 RNK tokom 4 sata na 37℃ nije rezultirala degradacijom RNK koja se nije mogla detektovati kao što je utvrđeno gel elektroforezom.
E.coli DNK:
TaqMan qPCR detektuje 40 U enzima.DNK E.coli je ≤ 0. 1pg/40U.
Notes
1. Nemojte snažno tresti ili miješati kako biste spriječili inaktivaciju enzima.
2. Inhibitor RNaze je aktivan na temperaturama u rasponu od 25℃ do 55℃ i inaktiviran je na ≥65℃.
3. Aktivnost RNaze H, RNaze 1 i RNaze T1 nije inhibirana.
4. Opseg pH za inhibiciju aktivnosti RNKaze je širok (aktivan na pH 5-9), pokazujući maksimalnu aktivnost pri pH 7-8.
