One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Kataloški broj: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix je za kvantifikaciju fluorescencije na bazi SYBR Green I boje.Koristeći gen-specifične prajmere, reverzna transkripcija i qPCR reakcije se završavaju u jednoj epruveti, eliminišući potrebu za ponovljenim operacijama otvaranja poklopca i pipetiranja, značajno poboljšavajući efikasnost analize i smanjujući rizik od kontaminacije.Za uzorke RNK, komplet koristi reverznu transkriptazu otpornu na toplotu za efikasnu sintezu cDNK i HotStart Taq DNK polimerazu za kvantitativno pojačanje.Pod optimizovanim pufer sistemom, osetljivost kompleta može biti čak 0,1 pg za visoko izražene mete i čak 1 pg za umereno izražene mete.Komplet je pogodan za amplifikaciju i kvantifikaciju DNK uzoraka.Omogućava osjetljivu detekciju i kvantifikaciju nukleinskih kiselina iz različitih biljnih i životinjskih uzoraka, stanica i mikroorganizama.
Komponente
| No | Ime | Volume | Volume |
| 1 | Advanced Buffer | 250 μL | 2×1,25 mL |
| 2 | Napredna mešavina enzima | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase bez H2O | 250 μL | 2×1,25 mL |
Uslovi skladištenja
Ovaj proizvod treba čuvati na -25~-15℃ daleko od svjetlosti 1 godinu.
Instrukcije
1. Konfiguracija reakcionog sistemad
| Komponente | Zapremina (μL) | Zapremina (μL) | Konačna koncentracija |
| Advanced Buffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Napredna mešavina enzima | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Reverse Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase bez H2Oc | do 25 | do 50 | - |
napomene:
1) a.Tkonačna koncentracija prajmera bila je 0,2 μmol/L, koja se takođe može podesiti između 0,1 i 1 μmol/L prema potrebi.
2) b.Reagens je izuzetno osjetljiv, sa ukupnom RNK u rasponu od 1pg-1μg, a testiranje ljudskih uzoraka pokazalo je optimalan unos od 1 pg-100 ng, kontrolirajući ukupnu vrijednost Ct u rasponu od 15-30 prema potrebi.
3) c.Preporučuje se upotreba 20 μL ili 50 μL kako bi se osigurala valjanost i reproduktivnost amplifikacije ciljnog gena.
4) d.Molimo pripremite se u ultra čistoj klupi i koristite vrhove i epruvete za reakciju bez ostataka nukleaze;preporučuju se nastavci sa filter ulošcima.Izbjegavajte unakrsnu kontaminaciju i kontaminaciju aerosolom.
2.Reakcioni program
| Korak ciklusa | Temp. | Vrijeme | Ciklusi |
| Reverzna transkripcija | 50℃a | 6mins | 1 |
| Početna denaturacija | 95℃ | 5mins | 1 |
| Reakcija amplifikacije | 95℃ | 15 sek | 40 |
| 60℃b | 30 sec | ||
| Faza krivulje topljenja | Zadane postavke instrumenta | 1 | |
napomene:
1) a.Temperatura reverzne transkripcije može se odabrati između 50-55°C prema eksperimentalnim potrebama.Za uzorke DNK, proces reverzne transkripcije može biti izostavljen.
2) b.U posebnim slučajevima temperatura žarenja/produživanja se može podesiti prema vrijednosti prajmera Tm, preporučuje se 60°C.
Bilješke
1. Ovaj proizvod je samo za istraživačku upotrebu.
2. Radi vaše sigurnosti radite u laboratorijskim mantilima i jednokratnim rukavicama.
