Komplet za genotipizaciju miša

Kataloški broj: HCR2021A

Ovaj proizvod je komplet dizajniran za brzu identifikaciju genotipova miša, uključujući ekstrakciju sirove DNK i PCR sistem amplifikacije.Proizvod se može koristiti za PCR amplifikaciju direktno iz mišjeg repa, uha, prstiju i drugih tkiva nakon jednostavnog cijepanja puferom za lizu i proteinazom k.Nema digestije preko noći, ekstrakcije fenol-hloroformom ili prečišćavanja na koloni, što je jednostavno i skraćuje vreme eksperimenata.Proizvod je pogodan za amplifikaciju ciljnih fragmenata do 2 kb i multipleks PCR reakcije sa do 3 para prajmera.2×Mouse Tissue Direct PCR Mix sadrži genetski modifikovanu DNK polimerazu, Mg²⁺, dNTP i optimizirani sistem pufera koji osigurava visoku efikasnost amplifikacije i toleranciju inhibitora, tako da se PCR reakcije mogu izvesti dodavanjem šablona i prajmera i rehidracijom proizvoda do 1×.PCR proizvod amplificiran ovim proizvodom ima istaknutu “A” bazu na 3′ kraju i može se koristiti direktno za TA kloniranje nakon pročišćavanja.

Komponente

Uslovi skladištenja

Proizvode treba čuvati na -25~-15℃ 2 godine.Nakon odmrzavanja, pufer za lizu može se čuvati na 2~8℃ za kratkotrajnu višekratnu upotrebu i dobro promiješati kada se koristi.

Aplikacija

Ovaj proizvod je pogodan za analizu nokauta miša, detekciju transgena, genotipizaciju i tako dalje.

Karakteristike

1.Jednostavan rad: nema potrebe za ekstrahiranjem genomske DNK;

2.Široka primjena: pogodno za direktno pojačavanje različitih tkiva miša.

Instrukcije

1.Oslobađanje genomske DNK

1) Priprema lizata

Lizat tkiva se priprema prema broju uzoraka miševa koji se trebaju lizirati (lizat tkiva treba pripremiti na licu mjesta prema dozi i temeljito promiješati za upotrebu), a udio reagensa potrebnih za jedan uzorak je sljedeći:

2) Priprema uzorka i liza

Preporučena upotreba tkiva

Uzmite odgovarajuću količinu uzoraka mišjeg tkiva u čiste epruvete za centrifugiranje, dodajte 200 μL svježeg lizata tkiva u svaku epruvetu za centrifugiranje, protresite i protresite, zatim inkubirajte na 55 ℃ 30 minuta, a zatim zagrijte na 98 ℃ 3 minute.

3) Centrifugiranje

Dobro protresite lizat i centrifugirajte na 12.000 o/min 5 minuta.Supernatant se može koristiti kao šablon za PCR amplifikaciju.Ako je šablon potreban za skladištenje, prenesite supernatant u drugu sterilnu epruvetu za centrifugiranje i čuvajte na -20℃ 2 nedelje.

2.PCR amplifikacija

Uklonite 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix sa -20℃ i odmrznite na ledu, pomiješajte naopačke i pripremite PCR reakcijski sistem prema sljedećoj tabeli (radi na ledu):

Bilješka:

a) Dodata količina ne bi trebalo da prelazi 1/10 sistema, a ako se doda previše, PCR amplifikacija može biti inhibirana.

Preporučeni PCR uvjeti

Bilješka:

a) Temperatura žarenja: U odnosu na Tm vrijednost prajmera, preporučuje se da se temperatura žarenja podesi na manju vrijednost Tm prajmera +3~5℃.

Uobičajeni problemi i rješenja

1.Nema ciljanih traka

1) Prekomjeran proizvod lize.Odaberite najprikladniju količinu šablona, ​​obično ne više od 1/10 sistema;

2) Prevelika veličina uzorka.Razrijedite lizat 10 puta, a zatim pojačajte, ili smanjite veličinu uzorka i ponovno lizu;

3) Uzorci tkiva nisu svježi.Preporučuje se korištenje svježih uzoraka tkiva;

4) Loš kvalitet prajmera.Koristite genomsku DNK za amplifikaciju kako biste provjerili kvalitet prajmera i optimizirali dizajn prajmera.

2.Nespecifično pojačanje

1) Temperatura žarenja je preniska i broj ciklusa je previsok.Povećajte temperaturu žarenja i smanjite broj ciklusa;

2) Koncentracija šablona je previsoka.Smanjite količinu šablona ili razblažite šablon 10 puta nakon amplifikacije;

3) Slaba specifičnost prajmera.Optimizirajte dizajn prajmera.

Bilješke

1.Kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija između uzoraka, potrebno je pripremiti više alata za uzorkovanje, a površina alata se može očistiti 2% otopinom natrijevog hipoklorita ili sredstvom za čišćenje nukleinske kiseline nakon svakog uzorkovanja ako je potrebna ponovljena upotreba.

2.Preporučljivo je koristiti svježe mišje tkivo, a volumen uzorkovanja ne bi trebao biti prevelik kako bi se izbjeglo utjecaj na rezultate amplifikacije.

3.Pufer za lizu treba izbjegavati često zamrzavanje-odmrzavanje i može se čuvati na 2~8℃ za kratkoročnu višekratnu upotrebu.Ako se skladišti na niskoj temperaturi, može doći do taloženja i mora se potpuno otopiti prije upotrebe.

4.PCR mješavina treba izbjegavati često zamrzavanje-odmrzavanje i može se čuvati na 4℃ za kratkotrajnu ponovnu upotrebu.

5.Ovaj proizvod je samo za naučna eksperimentalna istraživanja i ne bi se trebao koristiti u kliničkoj dijagnozi ili liječenju.