RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Ovaj proizvod sadrži reakcijski pufer, mješavinu RT-enzima (Bst DNK polimerazu i reverznu transkriptazu otpornu na toplinu), liofilizirane zaštitne tvari i komponente kromogenih boja.Za korištenje, samo koristite pufer, reakcioni enzim i prajmer se pomiješaju i dodaju u šablon;dodavanje liofiliziranog zaštitnog sredstva može biti ravno.Spojen je na liofilizator i liofiliziran, a pri korištenju su dodavani samo prajmeri i šabloni.Ovaj komplet pruža brzu, jasnu vizuelnu detekciju pojačanja, čija je negativna reakcija označena crvenom, a pozitivna reakcija promjenom u žutu.
Komponenta
| Komponenta | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Pufer za amplifikaciju posredovan petljom (sa bojom) | 0,96 mL | 4,80 mL×2 | 9,60 mL×10 |
| RT-enzimska mješavina | 270 μL | 2,70 mL | 2,70 mL×10 |
| Liofilizirana zaštita | 0,96 mL×2 | 9,60 mL×2 | 9,60 mL×20 |
Prijave
Za izotermno pojačanje DNK ili RNK.
Uslovi skladištenja
Prevozi se sa suvim ledom, čuva se na -25~ -15℃.Izbjegavajte često zamrzavanje-odmrzavanje, proizvod vrijedi 12 mjeseci.
Protokol
1.Odmrznite reakcioni pufer koji će se koristiti na sobnoj temperaturi.Nakratko protresite ili preokrenite epruvete nekoliko puta da se dobro promešaju, a zatim centrifugirajte da biste sakupili tečnost na dno epruvete.
2.Priprema reakcionog sistema.Ovaj reagens se može pripremiti u dva reakciona sistema, tečna reakciona mešavina i liofilizovana sistemska mešavina.
1) Pripremite tečnu reakcijsku smjesu
| Komponenta | Volume |
| Pufer za amplifikaciju posredovan petljom (sa bojom) | 10 μL |
| RT-enzimska mješavina | 2,8 μL |
| 10 × Prajmer Mixa | 5 μL |
| Šabloni DNK/RNA b | × μL |
| Voda bez nukleaza | Do 50 μL |
2) Mešavina sistema za liofilizaciju
① Pripremite liofiliziranu smjesu
| Komponenta | Volume |
| Pufer za amplifikaciju posredovan petljom (sa bojom) | 10 μL |
| Liofilizirana zaštita | 20 μL |
| RT-enzimska mješavina | 2,8 μL |
| Voda bez nukleaza | Do 50 μL |
② Liofilizacija: Pripremljena mješavina je liofilizirana u sistemu od 50 μL
③ Pripremite reakcijsku smjesu
| Komponenta | Volume |
| Liofilizirana mješavina | 1 komad |
| 10 × Prajmer Mixa | 5 μL |
| Šabloni DNK/RNA b | × μL |
| Voda bez nukleaza | Do 50 μL |
napomene:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (topiv u vodi) se preporučuje za temp. nukleinske kiseline.
1.Inkubirajte na 65°C 30-45 minuta, što se može produžiti na odgovarajući način prema promjeni boje. Vrijeme reakcije.
2.Prema golim okom, žuta je bila pozitivna, a crvena negativna.
Bilješke
1.Na dnu epruvete pufera može se pojaviti sol, kratko vorteksati ili nekoliko puta preokrenuti cijevi da se dobro promiješa na sobnoj temperaturi.
2.Temperatura reakcije može se optimizirati između 62 ℃ i 68 ℃ u skladu sa stanjem prajmera.
3.Upakovani reagensi ne bi trebalo da budu izloženi vazduhu duže vreme.
4.Reakcija promjene boje crvene i žute ovisi o promjeni pH reakcionog sistema, nemojte koristiti otopinu za skladištenje Tris nukleinske kiseline koja sadrži ddH2O uskladištena nukleinska kiselina;
5.Eksperiment treba da bude standardizovan, uključujući pripremu reakcionog sistema, liofilizaciju i proces obrade uzoraka i dodavanja uzoraka;
6.Kako bi se izbjegla kontaminacija, preporuča se pripremiti reakcioni sistem u ultra čistoj klupi, u drugim dodacima u dimovodnu napu u prostoriji kako bi se izbjegle lažno pozitivne smetnje.
