Rnase A
Ribonukleaza A(RNAseA) je jednolančani polipeptid koji sadrži 4 disulfidne veze molekulske težine od oko 13,7 kDa.RNaza A je endoribonukleaza koja specifično razgrađuje jednolančanu RNK na C i U ostacima.Konkretno, cijepanje prepoznaje fosfodiestersku vezu formiranu od 5'-riboze nukleotida i fosfatne grupe na 3'-ribozi susjednog pirimidinskog nukleotida, tako da se 2,3'-ciklički fosfati hidroliziraju u odgovarajući3 'nukleozidni fosfati (npr. pG-pG-pC-pA-pG cijepa RNaza A da bi se stvorio pG-pG-pCp i A-PG).RNaza A je najaktivnija u cijepanju jednolančane RNK.Preporučena radna koncentracija je 1-100 μ G/mL, kompatibilna sa različitim reakcionim sistemima.Niska koncentracija soli (0-100 mM NaCl) može se koristiti za rezanje jednolančane RNK, dvolančane RNK i RNK lanaca formiranih RNA-DNK hibridizacijom.
Međutim, pri visokoj koncentraciji soli (≥0,3 M), RNaza A samo specifično cijepa jednolančanu RNK.
RNaza A se najčešće koristi za uklanjanje RNK tokom pripreme plazmidne DNK ili genomske DNK.Bez obzira da li je DNaza aktivna tokom procesa pripreme, može lako uticati na reakciju.Tradicionalna metoda ključanja u vodenom kupatilu može se koristiti za inaktivaciju aktivnosti DNaze.Ovaj proizvod ne sadrži DNazu i proteazu i ne zahtijeva toplinsku obradu prije upotrebe.Osim toga, ovaj proizvod se također može koristiti u eksperimentima molekularne biologije kao što su analiza zaštite RNaze i analiza RNA sekvence.
Uslovi skladištenja
Proizvod treba čuvati na -25℃~- 15℃ 2 godine.
Specifikacije
| Izgled | Puder |
| Količina | 100mg / 1g |
| Vrsta proizvoda | RNase A |
Instrukcije
Ovo je jedna od uobičajenih metoda za pripremu otopine za pohranu RNase A.Može se i pripremitidrugim metodama prema tradicionalnim metodama u laboratoriji ili referentnoj literaturi (nprdirektno otapanje u 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 ili Tris-NaCl otopini)
1. Koristite 10 mM natrijum acetata (pH 5,2) da pripremite 10 mg/mL rastvora za skladištenje RNaze A.
2. Zagrijavanje na 100 ℃ 15 min.
3. Ohladite na sobnu temperaturu, dodajte 1/10 zapremine 1 M Tris-HCl (pH 7,4), podesite pH na 7,4 (zana primjer, dodajte 500 mL 10 mg/mL RNase rastvora za skladištenje 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Podupakovano na -20℃ za zamrznuto skladištenje, koje može biti stabilno do 2 godine.
[Napomene]:
Prilikom ključanja rastvora RNazeA u neutralnim uslovima, formiraće se precipitacija RNaze;Kuhajte ga na nižem pH, a ako ima taloga, može se uočiti, što može biti uzrokovano prisustvom proteinskih nečistoća.Ako se nakon ključanja nađe sediment, nečistoće se mogu ukloniti centrifugiranjem velikom brzinom (13000 rpm), a zatim podpakirati za skladištenje u zamrzavanju.
Bilješke
Nosite neophodnu osobnu zaštitnu opremu, kao što je laboratorijski mantil i rukavice, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost.
