Multiplex One Step RT-qPCR Premix
Opis
Kataloški broj: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix je multipleksni kvantitativni PCR komplet baziran na RNK kao šablonu.U eksperimentu se reverzna transkripcija i kvantitativna PCR izvode u istoj reakcijskoj epruveti, pojednostavljujući eksperimentalni rad i smanjujući rizik od kontaminacije.Jedinstveni dizajn mješavine pufera i enzima može se koristiti u liofiliziranom sistemu u jednom koraku.Komplet koristi reverznu transkriptazu otpornu na toplotu za efikasnu sintezu cDNK prvog lanca koristeći hotstart Taq DNK polimerazu za kvantitativno pojačanje.Sadrži optimizovani reakcioni pufer, mešavinu enzima itd., a dodani su faktori koji efikasno inhibiraju nespecifičnu PCR amplifikaciju i poboljšavaju efikasnost višestrukih qPCR reakcija, omogućavajući višestruku fluorescenciju kvantitativnog amplifikacije istovremeno obezbeđujući efikasnost amplifikacije prajmera.
Komponente
| Ime |
| 1. Lyo-Buffer |
| 2. Lio-enzimska mješavina |
| 3. Lyo protectant |
Uslov transportaion
O: Lio pufer i zaštitni agens: -25~-15℃, rok trajanja je 1 godina.
B: Lio-enzimska mješavina, 2-8 ℃, rok trajanja je 6 mjeseci.
Uputstvo za rad
1. Reakcioni sistem (uzmite 25μL kao primjer)
| Komponente | Zapremina (μL) | Konačna koncentracija |
| Lyo-Buffer | 6 | 1* |
| Lio-enzimska mješavina | 1 | - |
| Lyo-Protectant | 8 | - |
| Smjesa prajmera (10μM) | 1 | 0.1- 1uM |
| Mješavina sonde (10μM) | 0.5 | 0,05-0,5uM |
| RNA Template | 5 | - |
| DEPC H2O | Do 25 | - |
2. Optimizirani biciklistički protokol
1) Standardni biciklistički protokol
| Faza reakcije | Temperatura | Vrijeme | Ciklus | |
| 1 | Reverzna transkripcija | 50°Ca | 10min | 1 |
| 2 | Početna denaturacija | 95°C | 5min | 1 |
| 3 | Reakcija amplifikacije | 95°C | 15sec | 45 ciklusa |
| 60°Cb | 30secc |
2) Protokol za brzi ciklus
|
| Faza reakcije | Temperatura | Vrijeme | Ciklus |
| 1 | Reverzna transkripcija | 50°Ca | 2min | 1 |
| 2 | Početna denaturacija | 95°C | 2sec | 1 |
| 3 | Reakcija amplifikacije | 95°C | 1sec |
45 ciklusa |
| 60°Cb | 13secc |
Bilješka:
a) Obrnuto transkripcija: Temperatura može izabrati 42°C ili 50°C u trajanju od 10-15 minuta.
b) Reakcija amplifikacije: Temperatura se podešava prema Tm vrijednosti dizajniranih prajmera.
c)Fluorescencija signal akvizicija: Molimo postavite eksperimentalni postupak u skladu sa zahtjevimapriručnik za instrumente.
Tehničke informacije/specifikacije
| Hot Start | Ugrađeni vrući start |
| Metoda detekcije | Detekcija prajmera i sonde |
| PCR metoda | RT-qPCR u jednom koraku |
| Vrsta uzorka | RNA |
Bilješke
1. Ovaj proizvod je samo za istraživačku upotrebu.
2. Nosite neophodnu osobnu zaštitnu opremu, kao što je laboratorijski mantil i rukavice, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost!
