Warm Start Bst 2.0 DNK polimeraza (bez glicerola)
Bst DNK polimeraza V2 je izvedena iz Bacillus stearothermophilus DNK polimeraze I, koja ima aktivnost 5′→3′ DNK polimeraze i snažnu aktivnost zamjene lanca, ali nema aktivnost 5′→3′ egzonukleaze.Bst DNK polimeraza V2 je idealno pogodna za pomicanje lanaca, izotermno pojačanje LAMP (izotermno pojačanje posredovano petljom) i brzo sekvenciranje.Bst DNK polimeraza V2 je verzija s vrućim startom zasnovana na Bst DNK polimerazi V2 (HC5005A) dobijenoj tehnologijom reverzibilne modifikacije, koja može inhibirati aktivnost DNK polimeraze na sobnoj temperaturi, tako da reakcioni sistem može raditi i formulirati na sobnoj temperaturi kako bi se spriječilo ne -specifično pojačanje i poboljšanje efikasnosti reakcije, a ova verzija se može liofilizirati.Osim toga, njegova aktivnost se oslobađa na visokim temperaturama, tako da nema potrebe za posebnim korakom aktivacije.
Komponente
| Komponenta | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNK polimeraza V2 (bez glicerola) (8U/μL) | 0,2 mL | 1 mL | 10 mL |
| 10×HC Bst V2 pufer | 1,5 mL | 2×1,5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1,5 mL | 2×1,5 mL | 2×10 mL |
Prijave
1.LAMP izotermno pojačanje
2.Reakcija jednostrukog pomicanja DNK lanca
3.Visoko GC sekvenciranje gena
4.DNK sekvenciranje nivoa nanograma.
Stanje skladištenja
Transportovati na temperaturi od 0°C i čuvati na -25°C~-15°C.
Definicija jedinice
Jedna jedinica je definirana kao količina enzima koja inkorporira 25 nmol dNTP u materijal nerastvorljiv u kiselini za 30 minuta na 65°C.
Kontrola kvaliteta
1.Test čistoće proteina (SDS-PAGE):Čistoća Bst DNK polimeraze V2 je ≥99% određena SDS-PAGE analizom koristeći Coomassie Blue detekciju.
2.EdonukleazaAktivnost:Inkubacija reakcije od 50 μL koja sadrži najmanje 8 U Bst DNK polimeraze V2 sa 1 μg λDNA tokom 16 sati na 37 ℃ ne rezultira degradacijom kao što je utvrđeno.
3.Exonuclease Activity:Inkubacija reakcije od 50 μL koja sadrži najmanje 8 U Bst DNK polimeraze V2 sa 1 μg λ -Hind Ⅲ digestije DNK tokom 16 sati na 37 ℃ ne rezultira degradacijom koja se može detektovati kako je utvrđeno.
4.Nickase Activity:Inkubacija reakcije od 50 μL koja sadrži minimalno 8 U Bst DNK polimeraze V2 sa 1 μg pBR322 DNK tokom 16 sati na 37°C ne rezultira degradacijom kao što je utvrđeno.
5.Aktivnost RNase:Inkubacija reakcije od 50 μL koja sadrži najmanje 8 U Bst DNK polimeraze V2 sa 1,6 μg MS2 RNK tokom 16 sati na 37°C ne rezultira degradacijom kao što je utvrđeno.
6.E. coliDNK:120 U Bst DNK polimeraze V2 testirano je na prisustvo genomske DNK E. coli pomoću TaqMan qPCR sa prajmerima specifičnim za lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminacija genomske DNK E. coli je ≤1 kopija.
LAMP Reaction
| Komponente | 25μL |
| 10×HC Bst V2 pufer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μL |
| dNTP (10mM svaki) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Green (25×)a | 1,0 μL |
| Primer mešavinab | 6 μL |
| Bst DNK polimeraza V2 (bez glicerola) (8 U/uL) | 1 μL |
| Predložak | × μL |
| ddH₂O | Do 25 μL |
napomene:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Prema eksperimentalnim potrebama, druge boje se mogu koristiti kao zamjene;
2) b.Primer mešavina: dobijena mešanjem 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB i drugih zapremina.
Reakcija i stanje
1 × HC Bst V2 pufer, temperatura inkubacije je između 60°C i 65°C.
Inaktivacija toplote
80°C, 20 min
