Robustart Taq DNK polimeraza

Robustart Taq DNK polimeraza je DNK polimeraza za vrući početak.Ovaj proizvod ne samo da može bolje inhibirati nespecifičnu reakciju uzrokovanu nespecifičnim žarenjem prajmera ili agregacijom prajmera u procesu pripreme i amplifikacije PCR sistema.Zbog toga ima odličnu specifičnost i efikasniji je za amplifikaciju šablona niske koncentracije, a pogodan je i za multipleksiranu PCR reakciju amplifikacije.Štaviše, ovaj proizvod ima vrlo dobru primjenjivost, a stabilni rezultati amplifikacije mogu se dobiti u različitim tipovima PCR reakcija.

Komponente

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimeraza

2.10 × PCR pufer II (bez Mg²+) (opciono)

3.25 mM MgCl₂(opciono)

* 10 × PCR pufer II (bez Mg²+) ne sadrži dNTP i Mg²+, molimo dodajte dNTP i MgCl₂prilikom pripreme reakcionog sistema.

Preporučene aplikacije

1.Brzo pojačanje.

2.Višestruko pojačanje.

3.Direktna amplifikacija krvi, briseva i drugih uzoraka.

4.Otkrivanje respiratornih bolesti.

Stanje skladištenja

-20°C za dugotrajno skladištenje, treba dobro promešati pre upotrebe, izbegavati često zamrzavanje-odmrzavanje.

*Ako nakon hlađenja dođe do padavina, to je normalno;preporuča se ravnoteža na sobnoj temperaturi prije miješanja i upotrebe.

Definicija jedinice

Jedna aktivna jedinica (U) je definirana kao količina enzima koja inkorporira 10 nmol deoksiribonukleotida u materijal nerastvorljiv u kiselini na 74°C tokom 30 minuta koristeći aktiviranu DNK sperme lososa kao šablon/prajmer.

Kontrola kvaliteta

1.SDS-PAGE elektroforetska čistoća veća od 98%.

2.Osetljivost pojačanja, kontrola od serije do serije, stabilnost.

3.Nema aktivnosti egzogene nukleaze, nema egzogene endonukleaze ili kontaminacije egzonukleazom

Instrukcije

Reaction Setup

napomene:

1) a.Pufer ne sadrži dNTP i Mg²+, molimo dodajte dNTP i MgCl₂prilikom pripreme reakcionog sistema.

2) b.Ako se koristi za qPCR/qRT-PCR, fluorescentne sonde treba dodati u reakcioni sistem.Obično, konačna koncentracija prajmera od 0,2 μM daje dobre rezultate;ako je učinak reakcije loš, koncentracija prajmera može se podesiti u rasponu od 0,2-1 μM.Koncentracija sonde se obično optimizira u rasponu od 0,1-0,3 μM.Eksperimenti sa gradijentom koncentracije mogu se izvesti kako bi se pronašla najbolja kombinacija prajmera i sonde.

Protokol termičkog ciklusa

Bilješke

1.Brzina amplifikacije brze DNK polimeraze ne bi trebala biti manja od 1 kb/10 s.Brzina porasta i pada temperature, način kontrole temperature i efikasnost provodljivosti toplote različitih PCR instrumenata uveliko variraju, pa se preporučuje optimizacija optimalnih uslova reakcije za određeni brzi PCR instrument.

2.Sistem je vrlo prilagodljiv, sa većom specifičnošću i osjetljivošću.

3.Pogodan za upotrebu kao visokoosjetljivi PCR reagensi za detekciju i može se koristiti u multipleks PCR reakcijama amplifikacije.

4.5′→3′ aktivnost polimeraze, 5′→3′ aktivnost egzonukleaze;nema aktivnosti 3′→5′ egzonukleaze;nema funkciju lekture.

5.Pogodno za kvalitativno i kvantitativno testiranje PCR i RT-PCR.

6.3′ kraj PCR proizvoda je A, koji se može direktno klonirati u T vektor.

7.Metoda u tri koraka se preporučuje za prajmere sa niskim temperaturama žarenja ili za amplifikaciju fragmenata dužih od 200 bp.