Dnaza I (bez Rnaze) (5u/ul)
Kataloški broj: HC4007A
Dnaza I (deoksiribonukleaza I) je endodeoksiribonukleaza koja može probaviti jednolančanu ili dvolančanu DNK.Prepoznaje i cijepa fosfodiestarske veze kako bi proizveo monodeoksinukleotide ili jednolančane ili dvolančane oligodeoksinukleotide s fosfatnim grupama na 5'-terminalu i hidroksil na 3'-terminalu.Aktivnost DNaze I zavisi od Ca2+i može se aktivirati jonima dvovalentnih metala kao što je Mn2+i Zn2+.5 mM Ca2+štiti enzim od hidrolize.U prisustvu Mg2+, enzim bi mogao nasumično prepoznati i rascijepiti bilo koje mjesto na bilo kojoj lancu DNK.U prisustvu Mn2+, dvostruki lanci DNK mogu se istovremeno prepoznati i odcijepiti na gotovo istom mjestu da bi se formirali ravni kraji DNK fragmenti ili ljepljivi krajevi DNK fragmenti sa 1-2 nukleotida koji vire.
Komponente
| Ime | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNaza I, bez RNaze | 20μL | 200μL | 1mL | 10 mL |
| 10×DNase I pufer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 mL |
Uslovi skladištenja
-25℃~-15℃ za skladištenje;Transport ispod leda.
Instrukcije
1. Pripremite reakcionu otopinu u epruveti bez RNaze prema dolje navedenim proporcijama:
| Komponenta | Volume |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I pufer | 1μL |
| DNaza I, bez RNaze (5U/μL) | 1 U po µg RNA① |
| ddH2O | Do 10μL |
Napomena: ①Izračunajte zapreminu DNaze I koju treba dodati na osnovu količine RNK.
2. 37 ℃ tokom 15 minuta;
3. Dodajte 0,5M EDTA do konačne koncentracije od 2,5mM~5mM i zagrijavajte na 65℃ 10 minuta da zaustavite reakciju.Uzorak se može direktno koristiti za sljedeću reakciju kao što je reverzna transkripcijaeksperiment.
Definicija jedinice
Jedna jedinica je definirana kao količina enzima koja će u potpunosti razgraditi 1 µg pBR322DNK za 10 minuta na 37℃.
Kontrola kvaliteta
RNase:5U DNaze I sa 1,6 µg MS2 RNK tokom 4 sata na 37℃ ne daje degradaciju jerodređena elektroforezom u agaroznom gelu.
Bilješke
1. Molimo vas da sami pripremite 0,5MEDTA.
2. Koristite 1U DNazu I po µg RNK.Međutim, ako je RNK manja od 1 µg, koristite 1U DNazu I.
3. Stavite enzim na led tokom rada.
