BspQI
BspQI se može rekombinantno eksprimirati u E. coli koja može prepoznati određena mjesta i proizvodi se pod
BspQI, restrikcijska endonukleaza IIs, izvedena je iz rekombinantnog soja E. coli koji nosi klonirani i modificirani gen BspQI iz Bacillus sphaericus.Može prepoznati određena mjesta, a sekvenca prepoznavanja i mjesta cijepanja su kako slijedi:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Karakteristike proizvoda
1. Visoka aktivnost, Brza probava;
2. Niska aktivnost zvijezda, osigurava precizno sečenje poput „skalpela“;
3. Bez BSA i bez životinjskog porijekla;
Methylation Sensitivity
Dam metilacija:Not Sensitive;
Dcm metilacija:Not Sensitive;
CpG metilacija:Not Sensitive;
Uslovi skladištenja
Proizvod treba otpremiti ≤ 0℃;Čuvati na temperaturi od -25~- 15℃.
Međuspremnik za pohranu
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitola, 500 µg/ml rekombinantnog albumina, 0,1% Trition X-100 i 50% glicerola (pH 7,0°C).
Definicija jedinice
Jedna jedinica je definisana kao količina enzima potrebna za varenje 1 µg DNK interne kontrole u toku 1 sata na 50°C u ukupnoj zapremini reakcije od 50 µL.
Kontrola kvaliteta
Test čistoće proteina (SDS-PAGE):Čistoća BspQI bila je ≥95% određena SDS-PAGE analizom.
RNase:10U BspQI sa 1,6 μg MS2 RNK tokom 4 sata na 50℃ ne daje degradaciju kao što je utvrđeno elektroforezom u agaroznom gelu.
Nespecifična aktivnost Dnaze:10U BspQI sa 1μg λ DNK na 50℃ tokom 16 sati, u poređenju sa 50℃ tokom 1 sata, ne daje višak DNK kao što je utvrđeno elektroforezom u agaroznom gelu.
Ligacija i rekonstrukcija:Nakon digestije 1 μg λDNA sa 10U BspQI, fragmenti DNK mogu se vezati sa T4 DNK ligazom na 16ºC.I ovi vezani fragmenti se mogu ponovo rezati sa BspQI.
E. coli DNK: E. coli 16s rDNA-specifična TaqMan qPCR detekcija je pokazala da je ostatak genoma E.coli ≤ 0,1 pg/ul.
Ostaci proteina domaćina:≤ 50 ppm
Bakterijski endotoksin: LAL-test, prema Kineskoj farmakopeji IV izdanje 2020., metoda ispitivanja ograničenja gela, opće pravilo (1143).Sadržaj bakterijskog endotoksina bi trebao biti ≤10 EU/mg.
Reakcioni sistem i uslovi
| Komponenta | Volume |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNK | 1 μg |
| 10 x BspQ I pufer | 5 μL |
| dd H2O | Do 50 μL |
Uslovi reakcije: 50℃, 1~ 16 h.
Toplotna inaktivacija: 80°C 20 min.
Preporučeni reakcioni sistem i uslovi mogu obezbediti relativno dobar efekat varenja enzima, što je samo za referencu, molimo pogledajte eksperimentalne rezultate za detalje.
Primjena proizvoda
Restrikcijska endonukleaza digestija, brzo kloniranje.
Bilješke
1. Volumen enzima ≤ 1/10 zapremine reakcije.
2. Zvjezdasta aktivnost se može javiti kada je koncentracija glicerola veća od 5%.
3. Aktivnost cijepanja može se pojaviti kada je supstrat ispod preporučenog omjera.
