prou
Proizvodi
Enzim za zatvaranje virusa vakcinije HCP1018A Istaknuta slika
  • Enzim za zatvaranje virusa vakcinije HCP1018A

Enzim za zatvaranje virusa vakcinije


Kat. br.: HCP1018A

Pakovanje: 200μL/1mL/10mL/100mL/1000mL

Enzim za zatvaranje virusa vakcinije je izveden iz rekombinantnog soja E. coli koji nosi gene za enzim za zatvaranje vakcine.

opis proizvoda

Podaci o proizvodu

Enzim za zatvaranje virusa vakcinije je izveden iz rekombinantnog soja E. coli koji nosi gene za enzim za zatvaranje vakcine.Ovaj pojedinačni enzim se sastoji od dvije podjedinice (D1 i D12) i ima tri enzimske aktivnosti (RNA trifosfataza i gvanililtransferaza od strane D1 podjedinice i gvanin metiltransferaze od strane D12 podjedinice).Enzim za zatvaranje virusa vakcinije je efikasan za katalizu formiranja strukture kapice, koja može specifično vezati 7-metilgvanilatnu kapastu strukturu (m7Gppp, Cap 0) na 5′ kraj RNK.Struktura kape (Cap 0) igra važnu ulogu u stabilizaciji, transportu i translaciji mRNA kod eukariota.Pokrivanje RNK enzimskom reakcijom je efikasna i jednostavna metoda koja može značajno poboljšati stabilnost i translaciju RNK za in vitro transkripciju, transfekciju i mikroinjekciju.


  • Prethodno:
  • Sljedeći:

  • Komponente

    Enzim za zatvaranje virusa vakcinije (10 U/μL)

    10×Bafer za zatvaranje

     

    Uslovi skladištenja

    -25~- 15℃ za skladištenje ( Izbjegavajte ponovljene cikluse zamrzavanja-odmrzavanja)

     

    Međuspremnik za pohranu

    20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM NaCl,

    1mM DTT, 0,1mM EDTA, 0,1% Triton X-100, 50% glicerol.

     

    Definicija jedinice

    Jedna jedinica enzima za zatvaranje virusa vakcinije definira se kao količina enzima potrebna da se 10 pmol GTP-a ugradi u 80nt transkript za 1 sat na 37°C.

     

    Kontrola kvaliteta

    egzonukleaza:10U enzima za zatvaranje virusa vakcinije sa 1 μg λ-Hind III digestira DNK na 37 ℃ tokom 16 sati ne daje degradaciju kao što je utvrđeno elektroforezom u agaroznom gelu.

    endonukleaza:10U enzima za zatvaranje virusa vakcinije sa 1μg λDNA na 37℃ tokom 16 sati ne daje degradaciju kao što je utvrđeno elektroforezom u agaroznom gelu.

    nadimak:10U enzima za zatvaranje virusa vakcinije sa 1 μg pBR322 na 37 ℃ tokom 16 sati ne daje degradaciju kao što je utvrđeno elektroforezom agaroznog gela.

    RNase:10U enzima za zatvaranje virusa vakcinije sa 1,6 μg MS2 RNK tokom 4 sata na 37℃ ne daje degradaciju kao što je utvrđeno elektroforezom u agaroznom gelu.

    1.coli DNK:10U enzima za zatvaranje virusa vakcinije je testiran na prisustvo genomske DNK E. coli koristeći TaqMan qPCR sa prajmerima specifičnim za lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminacija genomske DNK E. coli je ≤1 genoma E. coli.

    2.Bakterijski endotoksin: LAL-test, prema Kineskoj farmakopeji IV izdanje 2020., metoda ispitivanja ograničenja gela, opće pravilo (1143).Sadržaj bakterijskog endotoksina bi trebao biti ≤10 EU/mg.

     

    Reakcioni sistem i uslovi

    1. Protokol zatvaranja (reakcioni volumen: 20 μL)

    Ovaj postupak je primjenjiv na reakciju zatvaranja 10 μg RNK (≥100 nt) i može se povećati prema eksperimentalnim zahtjevima.

    I) Kombinujte 10 μg RNK i H2O bez nukleaze u epruveti za mikrofugiranje od 1,5 ml do konačne zapremine od 15,0 µL.*10×pufer za zatvaranje: 0,5M Tris-HCl, 50 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, (25℃, pH 8,0)

    2) Zagrevajte na 65℃ 5 minuta nakon čega sledi ledena kupka 5 minuta.

    3) Dodajte sljedeće komponente navedenim redoslijedom

    Component

    Volume

    Denaturirana RNK (≤10μg, dužina≥100 nt)

    15 μL

    10×bafer za zatvaranje*

    2 μL

    GTP (10 mM)

    1 μL

    SAM (2 mM)

    1 μL

    Enzim za zatvaranje virusa vakcinije (10U/μL)

    1 μL

    *10×pufer za zatvaranje: 0,5 M Tris-HCl, 50 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, (25 ℃, pH 8,0)

    4) Inkubirajte na 37°C 30 minuta, RNA je sada zatvorena i spremna za nizvodne primjene.

    2. 5′ terminal reakcija označavanja (reakcioni volumen: 20 μL)

    Ovaj protokol je dizajniran za označavanje RNK koja sadrži 5´ trifosfat i može se povećati prema zahtjevima.Na efikasnost ugradnje etikete će uticati molarni odnos RNK:GTP, kao i sadržaj GTP u uzorcima RNK.

    1) Kombinujte odgovarajuću količinu RNK i H2O bez nukleaze u epruveti za mikrofugiranje od 1,5 ml do konačne zapremine od 14,0 µL.

    2) Zagrevajte na 65℃ 5 minuta nakon čega sledi ledena kupka 5 minuta.

    3) Dodajte sljedeće komponente navedenim redoslijedom.

    Component

    Volume

    Denaturirana RNA

    14 μL

    10×Bafer za zatvaranje

    2 μL

    GTP mix**

    2 μL

    SAM (2 mM)

    1 μL

    Enzim za zatvaranje virusa vakcinije (10U/μL)

    1 μL

    ** GTP MIX se odnosi na GTP i mali broj markera.Za koncentraciju GTP, pogledajtena napomenu 3.

    4) Inkubirajte na 37°C 30 minuta, RNA 5′ kraj je sada označen i spreman za nizvodno

     

    Prijave

    1. Zatvaranje mRNA prije translacijskih testova/in vitro translacije

    2. Označavanje 5´ kraja mRNA

     

    Napomene o upotrebi

    1.Zagrijavanjem otopine RNK prije inkubacije s Vaccinia Capping Enzimom uklanja se sekundarna struktura na 5´kraju transkripta.Produžite vrijeme na 60 minuta za transkripte s poznatim visoko strukturiranim 5´krajovima.

    2. RNK koja se koristi za reakcije zatvaranja treba pročistiti prije upotrebe i suspendirati u vodi bez nukleaza.EDTA ne bi trebao biti prisutan i otopina bi trebala biti bez soli.

    3. Za označavanje 5´ kraja, ukupna koncentracija GTP bi trebala biti oko 1-3 puta veća od molarne koncentracije mRNA u reakciji.

    4. Volumen reakcionog sistema može se povećati ili smanjiti prema stvarnom.

    Napišite svoju poruku ovdje i pošaljite nam je