Ultra Nuclease
UltraNuclease je genetski inženjering endonukleza izvedena iz Serratia marcescens, koja je sposobna razgraditi DNK ili RNK, bilo dvolančanu ili jednolančanu, linearnu ili kružnu u širokom rasponu uvjeta, potpuno razgraditi nukleinske kiseline u 5'-monofosfatne baze s oligonukleotidima dužine 3-5 .Nakon modifikacije genetskog inženjeringa, proizvod je fermentiran, eksprimiran i prečišćen u Escherichia coli (E. coli), što smanjuje viskoznost ćelijskog supernatanta i ćelijskog lizata naučna istraživanja, ali i poboljšava efikasnost prečišćavanja i funkcionalna istraživanja proteina.Također se može koristiti u genskoj terapiji, pročišćavanju virusa, proizvodnji vakcina, farmaceutskoj industriji proteina i polisaharida kao reagens za uklanjanje ostataka nukleinske kiseline domaćina.
Karakteristike proizvoda
CAS br. | 9025-65-4 |
EC br. | |
Molekularna težina | 30kDa |
Izoelektrična tačka | 6.85 |
Protein Purity | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
Specific Activity | ≥1.1×106U/mg |
OptimumTemperature | 37°C |
Optimalni pH | 8.0 |
ProteaseActivity | negativan |
Bioburden | <10CFU/100,000U |
Rezidualni protein ćelije domaćina | ≤10ppm |
Teški metal | ≤10ppm |
Bakterijski endotoksin | <0,25EU/1000U |
Storage Buffer | 20mM Tris-HCl, pH 8,0, 2mM MgCl2 , 20mM NaCl ,50% glicerol |
Uslovi skladištenja
≤0°C transport;-25~-15°C Skladištenje, 2 godine valjanosti (izbjegavajte zamrzavanje-odmrzavanje).
Definicija jedinice
Količina enzima korištena za promjenu vrijednosti apsorpcije △A260 za 1,0 u roku od 30 minuta na 37 °C, pH 8,0, što je ekvivalent digestiranoj DNK sperme lososa od 37 μg rezanjem na oligonukleotide, definirana je kao aktivna jedinica (U).
Kontrola kvaliteta
Rezidualni protein ćelije domaćina: ELISA komplet
•Proteaza Ostaci: 250KU/mL UltraNukleaza je reagovala sa supstratom 60 minuta, nije otkrivena aktivnost.
•Bakterijski endotoksin: LAL-test, Farmakopeja Narodne Republike Kine, svezak 4 (izdanje 2020.) metoda ispitivanja ograničenja gela.Opšta pravila (1143).
•bioopterećenje: Farmakopeja Narodne Republike Kine, svezak 4 (izdanje 2020.)— Općenito
Pravila za testiranje sterilnosti (1101), Nacionalni standard NRK, GB 4789.2-2016.
•Teški metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operacija
Aktivnost ultranukleaze bila je značajno inhibirana kada je koncentracija SDS bila preko 0,1% ili EDTA
koncentracija je bila preko 1mM. Surfaktant Triton X-100, Tween 20 i Tween 80 nisu imali utjecaja na nukleazu
svojstva kada je koncentracija bila ispod 1,5%.
Operacija | Optimalni rad | Valid Operation |
Temperatura | 37℃ | 0-45℃ |
pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
Mg2+ | 1-2mM | 1- 15mM |
DTT | 0- 100mM | >100mM |
2-Merkaptoetanol | 0- 100mM | >100mM |
Monovalentni metalni jon (Na+, K+ itd.) | 0-20mM | 0-200mM |
PO43- | 0- 10mM | 0- 100mM |
Upotreba i doziranje
• Uklonite egzogenu nukleinsku kiselinu iz proizvoda vakcine, smanjite rizik od rezidualne toksičnosti nukleinske kiseline i poboljšate sigurnost proizvoda.
• Smanjite viskozitet tečnosti za hranu uzrokovanu nukleinskom kiselinom, skratite vreme obrade i povećajte prinos proteina.
• Uklonite nukleinsku kiselinu kojom je omotana čestica (virus, inkluzijsko tijelo, itd.), koja je pogodna
do oslobađanja i pročišćavanja čestica.
Eksperimentalni tip | Protein Production | Virus, vakcina | Cell Drugs |
Broj ćelija | 1 g vlažne težine ćelije (resuspendirano sa 10 ml pufera) | 1L fermentacije tečni supernatant | 1L kulture |
Minimalna doza | 250U | 100U | 100U |
Preporučena doza | 2500U | 25000U | 5000U |
• Tretman nukleazom može poboljšati rezoluciju i oporavak uzorka za kolonsku hromatografiju, elektroforezu i blot analizu.
• U genskoj terapiji, nukleinska kiselina se uklanja kako bi se dobili pročišćeni adeno-povezani virusi.