Temperaturno osjetljiv UNG

Temperaturno osjetljiv UNG (TS-UNG) je dobiven rekombinantnom ekspresijom u E. coli.Enzim katalizira oslobađanje slobodnog uracila iz jednolančane i dvolančane DNK koja sadrži uracil i neaktivan je protiv RNK.U poređenju sa konvencionalnim UNG enzimom porijeklom iz gena E. coli, TS-UNG enzim ima veću aktivnost na niskim temperaturama (20℃~37℃) i osjetljiv je na temperaturu i lako se inaktivira (50℃), izbjegavajući degradaciju amplifikacije koja sadrži dUTP proizvode na sobnoj temperaturi zaostalom aktivnošću koja može ostati nakon inaktivacije konvencionalnog UNG enzima.Stoga, TS-UNG enzim nije prikladan samo za reakciju prevencije kontaminacije PCR-om, već se dobro poklapa sa RT-PCR programom amplifikacije i može se koristiti u reakciji prevencije RT-PCR kontaminacije.

Preporučena aplikacija

Pojačavanje prevencije kontaminacije

Stanje skladištenja

-20°C za dugotrajno skladištenje, treba dobro promešati pre upotrebe, izbegavati često zamrzavanje-odmrzavanje.

Međuspremnik za pohranu

20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizator, 50% glicerol.

Definicija jedinice

Količina enzima potrebna za razgradnju 1 µg jednolančane DNK koja sadrži dU baze za 1 sat na 37°C je 1 jedinica aktivnosti (U).

Kontrola kvaliteta

1.SDS-PAGE elektroforetska čistoća veća od 98%

2.Aktivnost razgradnje, kontrola od serije do serije, stabilnost

3.Nema aktivnosti egzogene nukleaze, nema egzogene endonukleaze ili kontaminacije egzonukleazom.

Instrukcije

Napomena: a: Ako se koristi za qPCR/qRT-PCR, fluorescentnu sondu treba dodati u reakcioni sistem.Obično, konačna koncentracija prajmera od 0,2 μM može dati dobre rezultate;kada je učinak reakcije loš, koncentracija prajmera može se podesiti u rasponu od 0,2-1 μM.Obično se koncentracija sonde optimizira u rasponu od 0,1-0,3 μM.Eksperimenti sa gradijentom koncentracije mogu se izvesti kako bi se pronašla najbolja kombinacija prajmera i sonde.

Bilješke

1.Optimalna temperatura reakcije TS-UNG enzima je relativno niska i može se optimizirati u rasponu od 20℃~37℃, doza enzima i vrijeme reakcije mogu se optimizirati u rasponu od 0,1~0,5 U, 5~ 10 min;a enzim se može inaktivirati u procesu reverzne transkripcije.

2.Pogodan je za PCR i RT-PCR radi sprečavanja kontaminacije.

3.Izbjegavajte često zamrzavanje-odmrzavanje i ne izlažite velikim temperaturnim oscilacijama.

4.Različiti geni koji se amplificiraju imaju različitu iskoristivost dUTP-a i osjetljivost na enzim UNG, stoga, ako korištenje UNG sistema dovodi do smanjenja osjetljivosti detekcije, reakcioni sistem treba prilagoditi i optimizirati, ako vam je potrebna tehnička podrška, obratite se naša kompanija.